代謝組學(xué)是眾多組學(xué)的一種,是隨著生命科學(xué)的發(fā)展而發(fā)展起來的。代謝組學(xué)是目前關(guān)注度頗高的組學(xué),第一,大家普遍認可代謝物反映生物表型和狀態(tài);第二,代謝物認為是功能分子,信號分子,其慢慢和功能相掛鉤;第三,腸道微生物等新興研究熱點的帶動。通過上一節(jié)的曲線可以推測,代謝組學(xué)項目數(shù)量將慢慢趕上蛋白組學(xué)。
從基本組成來說,基因/轉(zhuǎn)錄組=測4種核苷酸序列;蛋白組=20種氨基酸排列;代謝組=測氨基酸+碳水化合物+有機酸+脂類等等,每一個分類都有N種。
從物質(zhì)鑒定的數(shù)量來說,不同生物物種的代謝物數(shù)量多且差異較大。例如簡單的擬南芥(Arabidopsis thaliana)能產(chǎn)生5000種以上的代謝物。小編作為代謝組學(xué)的分析人員,個人認為三大組學(xué)中,代謝組學(xué)是難度比較高的一個。一般包括樣品的采集和制備、代謝組學(xué)數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)預(yù)處理、多變量數(shù)據(jù)分析、生物標(biāo)志物識別和途徑分析等。
樣品的采集和制備:
代謝組學(xué)研究需要嚴格的實驗設(shè)計,首先需要采集足夠數(shù)量的代表性樣本,減少生物樣品個體差異對分析結(jié)果的影響。一般來說,動物模型>10例,臨床樣本>30例,細胞>6例,植物昆蟲微生物樣本等>6-8例。圖2展示的不同樣品類型在LC-MS檢測過程中,推薦的最低樣本量以及保存方式。
在預(yù)處理及保存過程中,需要快速處理樣品,比如血清血漿的收集需要在1h內(nèi)完成,避免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。由于代謝組學(xué)一次分析很多樣本且一般不可能在一天內(nèi)采集完成,所以樣品需要提前液氮速凍后,保存在-80℃條件下。同時,樣本不建議反復(fù)凍融,例如糞便/腸道內(nèi)容物中有非常多微生物,其代謝速度很快,反復(fù)凍融會對代謝水平有很大影響。
代謝組學(xué)分析平臺:
完成樣本的采集和預(yù)處理之后,代謝產(chǎn)物需要通過合適的方法進行測定。代謝組學(xué)的研究中一般有色譜、質(zhì)譜、NMR、毛細管電泳和紅外光譜等分離方法,其中色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS和GC-MS)的方法兼具有色譜的高分析度,質(zhì)譜的高靈敏度,應(yīng)用范圍較廣;NMR例如1H-NMR對含氫代謝產(chǎn)物進行檢測,能夠完成樣品中大多數(shù)化合物的檢測。圖5展示的是三大分析技術(shù)在檢測過程中的優(yōu)缺點。
因為LC-MS避免了GC-MS中繁雜的樣品前處理,其較高的靈敏度和較寬的動態(tài)范圍,已經(jīng)被越來越多的用于代謝組學(xué)的研究,它非常適合生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測。